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Uma análise do dna

Plasmid Miniprep

Este procedimento éusado para extrair DNA plasmidial de suspensões de células bacterianas e écom base no procedimento de lise alcalina desenvolvido por Birnboim e Doly(Nucleic Acids Research 7: 1513, 1979). O procedimento leva vantagemdo fato de que os plasmídeos são DNA superenrolado relativamente pequenomoléculas e DNA cromossômico bacteriano é muito maior e menorsuperenrolado. Essa diferença na topologia permite seletivaprecipitação do ADN cromossómico e proteínas celulares deplasmídeos e moléculas de RNA. As células são lisadas sob condições alcalinascondições, o que desnatura ácidos nucleicos e proteínas, e quandoa solução é neutralizada pela adição de acetato de potássio,DNA cromossômico e proteínas precipitam porque é impossíveleles renature corretamente (eles são tão grandes). Plasmids renaturecorretamente e ficar em solução, efetivamente separando-osDNA cromossômico e proteínas.

Procedimento

Nota: o procedimentoabaixo é usado para fazer minipreps duplicados. Isso proporciona balanceamentotubos para a centrífuga, bem como o dobro do produto quando vocêestão terminados.

1. Agite suavemente oconteúdo do tubo de cultura para ressuspender as células.

2. Etiquete dois 1,5 mltubos e pipeta 1000 uL da suspensão de células em cada tubo.

3. Feche as tampascoloque os tubos em uma centrífuga (lembre-se de equilibrar

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