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As táticas fundamentais usadas para causar tetraploidia

Existem três formas fundamentais de induzir a tetraploidia in vitro. A primeira estratégia é que um núcleo (2n) é geralmente fundido cirurgicamente em um óvulo fertilizado. Os embriões tetraplóides repetidamente uniformes foram fabricados por esse método, embora apenas 9–15% dos blastocistos de injeção o tenham causado devido a trauma operatório (Modlinski, 1981). A segunda técnica iria inibir a clivagem usando produtos químicos como a citocalasina B (CB), um desestabilizador de microtúbulos. A terceira estratégia foi a técnica mais popular para criar embriões tetraplóides para gerar a fusão de dois embriões em estágio celular por corrente elétrica. O Sendaivírus inicialmente inativado foi usado como agente de fusão (Graham, 1971), mas a principal desvantagem dessa técnica era que os embriões em duas células precisam ser tratados individualmente, como resultado, causando a lenta taxa de produção de embriões.

Junto com isso, devido à associação com a rearea pelúcida (antes da fusão) e a cultura nos embriões por dois dias in vitro, a capacidade de sobrevivência dos embriões foi reduzida. Para poder produzir embriões tetraplóides, oócitos amadurecidos serão coletados 16 a 16 horas após as injeções de hCG e, então, serão artificiais artificialmente usando o CZB Channel, SrCl2 e Citocalasina M in Vitro, livres de cálcio. Depois disso, os embriões de duas células são eletrofundidos usando o sistema de fusão eletrocelular em uma solução ótima de eletrofusão para desenvolver embriões tetraplóides e, em seguida, classificados in vitro para o desenvolvimento pré-implantação de blastocisto. Então, simplesmente, as características do desenvolvimento pré-implantação de embriões tetraplóides são avaliadas simplesmente pela avaliação do redesenho cromossômico e criação de núcleos de menininhas após eletrofusão e cariotipagem de células tetraplóides que desejam no nível de blastocisto. A fosforilação / desfosforilação da histona H3 foi relatada por Bui ainsi que al. que é a principal função na condensação e descondensação cromossômica em oócitos (Bui et abordagem., 2007). Destinado a analisar a condensação e descondensação cromossômica, é utilizada a fosforilação de histonas para a serina 10 (p-H3-S10).

A eletrofusão é um dos procedimentos mais precisos, consideráveis, repetíveis, muito menos tóxicos e bem identificados, que geralmente é realizado com todos os embriões (estágio de 2 células) com zona pelúcida. Durante esse procedimento, esses embriões são colocados entre dois eletrodos no buffer de mistura; o estímulo elétrico é fornecido por uma duração muito curta (Darabi et approach., 2008). Durante a eletrofusão como resultado do campo elétrico aplicado de corrente contínua (DC), as membranas serão polarizadas e estabilizadas, resultando em atração de outra camada de membrana (fusão da camada de membrana pontual) e formação de diafragma de membrana de nível instável, através de poros reversíveis formação seguida de ruptura inversa com a membrana ou diafragma (Darabi et al., 2008). Sob ambiente favorável, o diafragma nivelado se transforma em fraco, permitindo a mistura celular, indicando através da fusão célula a célula (Chernomerdik e Sowers, 1991). Muitos fatores afetam a eficiência da fusão, como método de fusão, alinhamento de embriões entre eletrodos, número de pulsos, tempo de exposição direta e intensidade do campo elétrico. O alinhamento de embriões foi um fator importante referente à fusão bem-sucedida dos dois embriões em estágio celular. Os embriões devem ser alinhados dentro da câmara de fusão com seu eixo inter-blastomérico paralelo aos eletrodos usando corrente CA e, uma vez que o alinhamento realizado com corrente ATUAL ALTERNADA e manitol (solução não eletrolítica) foi útil para a fusão de embriões (Kubiak e Tarkowski, 1985 McLaughlin, 1993). Um campo de corrente alternada causa a polarização do embrião de 2 células e causa a rotação dos embriões de tal maneira que ocorreu o alinhamento adequado dos embriões para obter eletrofusão (McLaughlin, 1993).

Em ratos, a maior taxa de formação de blastocistos tetraplóides (93,0%) dos embriões fundidos foi atingida quando a eletrofusão foi realizada com 20 volts CA e 100 volts DC (Park ou al., 2011)

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